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冷凍細胞活化步驟

2022-01-19 瀏覽次數：1421

1.冷凍細胞的活化原則為快速解凍，避免冰晶重新結晶對細胞造成傷害，導致細胞死亡。


2.細胞活化后，約需數日，或繼代一至二代，其細胞生長或特性表現才會恢復正常(例如產
生單株抗體或是其它蛋白質)。2y2Q O6\#o&h4@+z,~
3.材料37℃ 恒溫水，新鮮培養基，無菌吸管/離心管/培養瓶，液氮或干冰容
4.步驟：
4.1操作人員應戴防護面罩及手套，防止冷凍管可能爆裂之傷害。
4.2自液氮或干冰容器中取出冷凍管，檢查蓋子是否旋緊，由于熱脹冷縮過程，此時蓋子易
松掉。
4.3將新鮮培養基置于37°C水槽中回溫，回溫后噴以70%酒精并擦拭之，移入無菌操作臺內。
4.4取出冷凍管，立即放入37°C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內全部融化以70%ethanol擦拭保存管外部，移入無菌操作臺內。
4.5取出0.9ml解凍之細胞懸浮液，緩緩加入有培養基之培養容器內(稀釋比例1:10～1:15)混合均勻，放入CO2培養箱培養。另取0.1ml解凍細胞懸浮液作存活測試。
4.6解凍后是否立即去除冷凍保護劑(例如DMSO或glycerol)，依細胞種類而異，一般而言大都不需要立即去除冷凍保護劑。惟若要立即去除，則將解凍之細胞懸浮液加入含有5-10ml培養基之離心管內，離心1,000rpm,5分鐘，移去上清液，加入新鮮培養基，混合均勻，放入CO2培養箱培養。
4.7若不需立即去除冷凍保存劑，則在解凍培養后隔日更換培養基。


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