hUC-MSCs ，人臍帶間充質干細胞說明書

中文名稱：人臍帶間充質干細胞 

代號：hUC–MSCs  

出售信息：P1-P3代

來源：取自滿月自然分娩的胎兒臍帶，檢測結果表明，本產品無細菌、真菌、支原體和病毒污染，表達多種間充質干細胞特異標記，具有良好的增殖和分化潛能，可以分化為成骨細胞、脂肪細胞、軟骨細胞等。

生長特性：貼壁生長（形態紡錘狀，成纖維細胞樣）

培養條件： DMEM/F12 90%+FBS 10%+b-FGF 10ng/mL （建議使用本公司間充質干細胞無血清培養基）

溫度：37℃  氣相：95%空氣，5%二氧化碳

培養瓶/皿：使用無血清培養基時應使用針對間充質干細胞特別TC處理的培養瓶/皿，或使用纖連蛋白或其他促貼壁試劑包被過的培養瓶/皿。

一、細胞特性：

經測試，本產品具有良好的增殖和分化潛能，可分化為成骨細胞、脂肪細胞、軟骨細胞等。流式檢測結果顯示，CD29、CD44、CD73、CD105、CD166陽性，CD11a、CD34、CD45陰性。

二、運輸保存：采用干冰保存運輸

收到細胞時，若干冰已經*融化，請立即將細胞復蘇培養；若尚留有干冰，請立即將細胞放入液氮中保存待用，請按條件貯存細胞，切不可將細胞置于高溫環境。

三、產品承諾：

人臍帶間質干細胞的體外培養周期有限。建議使用本公司配套的培養基和正確的培養方法來解凍、傳代，以此保證細胞具備良好的增殖和分化能力。

四、用途：

本產品只提供給進一步的科研使用，不可應用于治療、臨床等其他方面。

1、用75%酒精噴灑整個培養瓶消毒，將其平躺置于培養箱中進行1-3小時的緩沖，然后置于無菌操作臺，打開瓶口，將其中的培養液去掉，再往其中加入5-6 mL新鮮培養基（以T25培養瓶為例）并置于細胞培養箱中培養，根據細胞生長狀況及培養基顏色變化對其進行換液以及傳代，一般2到3天換一次液。

2、待細胞長滿瓶底面積80%-90%，需要對其進行傳代，次傳代比例為1:3，之后推薦傳代比例為1:5到1:10。

3、傳代步驟：將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液與DPBS置于37°預熱，倒掉培養瓶中的培養基，往培養瓶中加入3-5 ml DPBS，輕晃洗滌后棄去。使用DPBS將胰酶稀釋4倍，往瓶中加2 ml稀釋后的胰酶，置于室溫孵育消化（次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察，以顯微鏡下細胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細胞脫落為zui佳消化時間，記錄zui 佳消化時間，以便于下次消化），消化好后加入2ml含血清的*培養基或其他胰酶中和液終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞，使之*脫落，然后收集細胞懸液并吹打成單個細胞懸液，1200rpm離心5min，棄上清，加入*培養基重懸細胞，進行傳代。

五、凍存條件：液氮存儲

80%*培養基+10%FBS+10%DMSO，備注：建議使用本公司的冷凍液（H-W-100），用4度保存的冷凍液直接重懸細胞，不能預熱后使用。

六、常見問題以及解決方案：

1、培養瓶有破裂，培養液有漏液：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。

2、收到細胞后盡快更換為含 10%血清的新鮮培養基，如因特殊情況需要繼續使用原瓶培養基，請在原瓶培養基中額外添加 10%的血清（原瓶培養基的繼續使用時間zui長不宜超過 72 小時）。

3、細胞漂浮：培養瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養箱。1-2小時后觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉，留8-10ml培養液培養觀察，細胞生長至匯合度80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉到新培養瓶，原培養瓶加部分培養液繼續培養，中間注意觀察，我們的技術人員會一直跟蹤指導，直到問題解決。

  以上說明書僅供參考，請以隨貨說明書為主。