幾種常見的提取外泌體方法

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外泌體是大小30-200nm的膜性小囊泡，在血液、尿液、羊水、惡性腫瘤、腹水等體液及細胞培養上清中均存在。外泌體攜帶大量特異性的蛋白質和功能性的RNA等生物活性分子，和體內多種疾病的發生和發展密切相關。因外泌體攜帶重要的生物信息，使它具有很重要的潛在應用價值，一方面外泌體可以作為疾病的診斷標志物，另一方面外泌體可以作為一種治療手段，未來有望通過外泌體載藥用于疾病的治療。正因如此，外泌體的研究持續高熱度。

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外泌體研究的首要任務是對外泌體進行提取純化，提取外泌體的方法很多，那哪種方法提取外泌體*呢？

一、超速離心方法

原理：基于不同顆粒密度、沉降系數不同，利用低速離心和高速離心交替進行的方法分離外泌體顆粒。

優點：文獻引用較多，如實驗室設備條件滿足，可省成本

缺點：需要大型離心機，高離心力會損傷外泌體；操作耗時；步驟繁瑣；產量不穩定（受轉子、轉速、起始樣本量等多因素影響）；起始樣本量需求高

二、密度梯度離心

原理：在超速離心力的作用下，使氯化銫或蔗糖等介質形成密度階層，通過密度梯度離心，讓外泌體沉降在某一個密度范圍。

優點：純度相對較高

缺點：操作非常復雜且耗時，需要大型離心機

三、免疫磁珠法

表面包被標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后，特異性識別外泌體特異性標志物（CD9、CD81、CD63等）。

優點：操作簡單、純度較高

缺點：成本高；產量少，只能收集一類exosome，損失多；步驟繁瑣；種屬特異性限制；需要磁力架和冷凍離心機等儀器

四、PEG沉淀法

聚乙二醇（PEG）可與水分子形成網狀結構，捕獲一定粒徑大小的外泌體顆粒。

優點：操作簡單；不需要大型離心機等儀器

缺點：市面上品牌眾多，大多可靠性差；發表文章易受質疑等。

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介紹了這么多種方法，那究竟哪種方法是*的提取外泌體的方法呢？以上方法都有優劣，并沒有哪一種方法就是*方法，因綜合衡量實驗要求、實驗室經費、儀器設備等諸多因素。

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