BHT-101細胞，BHT-101細胞株的污染及制止

產(chǎn)品名稱：BHT-101細胞

中文名稱：未分化癌細胞

貨    號：BHT-101

規(guī)    格：1~3*106細胞/25cm2培養(yǎng)瓶

BHT-101細胞，BHT-101細胞株的污染及制止
按現(xiàn)代的觀念，凡是混入培養(yǎng)環(huán)境中對細胞生存產(chǎn)生有害的成分和造成細胞不純的異物都應(yīng)該視為污染。根據(jù)這一概念，組織培養(yǎng)污染物應(yīng)包括生物（真菌、細菌、病毒和支原體）、化學(xué)物質(zhì)（影響細胞生存、非細胞所需的化學(xué)成分）、細胞（非同種的其他細胞）。其中一微生物zui為多見。另外，隨著使用細胞種類增多，不同細胞交叉污染，尤其是Hela細胞的污染也時有發(fā)生，從而造成細胞不純。
一、污染途徑 污染物，特別是微生物常通過下列途徑進入培養(yǎng)體系，造成污染
1、空氣：空氣是微生物及塵埃顆粒傳播的主要途徑。空氣流動性大，如果培養(yǎng)操作場地于外界隔離不嚴格或消毒不充分，外界不潔空氣很容易進入造成污染。因此，培養(yǎng)設(shè)施不能設(shè)在通風(fēng)場所。無菌操作應(yīng)在凈化臺內(nèi)進行，工作時要帶口罩，以免因講話、咳嗽等使外界污染進入操作面，造成污染。
2、器材：各種培養(yǎng)器皿、器械消毒不*和洗刷不干凈導(dǎo)致污染，另外需要對培養(yǎng)箱進行定期消毒，防止形成污染
3、操作：實驗操作無菌觀念不強，技術(shù)不熟練，使用污染的器皿或封瓶不嚴等，都可以造成污染。培養(yǎng)兩種細胞以上時，操作不規(guī)范，交叉使用吸管或培養(yǎng)液、瓶等有可能導(dǎo)致細胞交叉污染。
4、血清：有些血清在生產(chǎn)時就已經(jīng)被支原體或病毒等污染，變成了污染。
5、組織樣本：原代培養(yǎng)的污染多數(shù)來源于組織樣本；取材時碘酒消毒后脫碘不*，可造成碘混入組織，細胞或培養(yǎng)液中，影響細胞細胞生長。
二、污染對培養(yǎng)細胞的影響及污染的檢測
由于體外培養(yǎng)細胞自身沒有抵抗污染的能力，而且培養(yǎng)基中的抗生素抗污染能力有限，因而培養(yǎng)細胞一旦發(fā)生污染多數(shù)將無法挽回。細胞污染早期或污染程度較輕時，如果能及時去除污染物，部分細胞有可能恢復(fù)、但是當(dāng)污染物持續(xù)存在培養(yǎng)環(huán)境中，輕者細胞生長緩慢，分類象減少，細胞變得粗糙，輪廓增強細胞漿出現(xiàn)顆粒、污染較嚴重，細胞增值停止，分裂象消失，細胞質(zhì)中出現(xiàn)大量堆積物，細胞變圓、脫壁。
（一）細菌污染對培養(yǎng)細胞的影響及污染物的檢測
常見的污染細菌有大腸桿菌、假單孢菌、葡萄球菌等。細菌污染初期由于培養(yǎng)體系的抗生素作用， 其繁殖處于抑制狀態(tài)，細胞生長不受明顯影響，污染情況用倒置顯微鏡觀察不易判斷。懷疑培養(yǎng)細胞有細菌污染時，取10ml細胞懸液離心1000轉(zhuǎn)5分鐘，沉淀中加入無抗生素培養(yǎng)液2ml,將細胞放培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
如果培養(yǎng)無真的細菌污染，24小時內(nèi)可以獲得陽性結(jié)果。當(dāng)污染的細菌量比較大或者細菌增殖到一定基數(shù)時，大約每20分鐘一代，會使培養(yǎng)系統(tǒng)中很快產(chǎn)生大量細菌，后者不僅可以消耗培養(yǎng)系統(tǒng)中的養(yǎng)分，還能釋放大量代謝產(chǎn)物。幾個小時后，增殖的細菌就可以導(dǎo)致培養(yǎng)液外觀渾濁，肉眼就可以判斷。細菌污染大多數(shù)可以改變培養(yǎng)液pH，使培養(yǎng)液變渾濁、變色。用相差顯微鏡觀察，可見滿視野都是點狀的細菌顆粒，原來的清晰培養(yǎng)背景變得模糊，大量的細菌甚至可以覆蓋細胞，對細胞的生存構(gòu)成威脅。用青霉素、鏈霉素可以預(yù)防細菌污染有效。
（二）真菌污染對細胞的影響及污染物的檢測
微生物污染中以真菌zui多，真菌種類繁多，形態(tài)各異，但是污染后易于發(fā)現(xiàn)，大多呈白色或淺黃色小點漂浮于培養(yǎng)液表面，肉眼可見；有的散在生長，鏡下可見呈絲狀、管狀、樹枝狀，縱橫交錯穿行于細胞之間。念珠菌和酵母菌卵圓形，散在細胞周邊和細胞之間生長。真菌生長迅速，能在短時間內(nèi)抑制細胞生長、產(chǎn)生有毒物質(zhì)殺死細胞。抗真菌制劑對預(yù)防和排除真菌污染有效。
（三）支原體污染對細胞影響及污染物的檢測
細胞培養(yǎng)（特別是傳代細胞）被支原體污染是個世界性問題,是細胞培養(yǎng)zui常見的、干擾試驗結(jié)果的一種污染。但由于不易被察覺，有些污染的細胞仍在被應(yīng)用。研究表明，95％以上是以下四種：口腔支原體（M.orale）、精氨酸支原體（M.arginini）、豬鼻支原體（M.hyorhinis）和萊氏無膽甾原體（A.laidlawii），為牛源性。以上是zui常見的污染細胞培養(yǎng)的支原體菌群，但能夠污染細胞的支原體種類是很多的，國外調(diào)查證明，大約有二十多種支原體能污染細胞，有的細胞株可以同時污染兩種以上的支原體。據(jù)查，目前各實驗室使用的二倍體細胞和傳代細胞中約有11%的細胞受到支原體污染。
污染來源包括工作環(huán)境污染、操作者本身污染（一些支原體在人體是正常菌群）、培養(yǎng)基污染、污染支原體的細胞造成的交叉污染、實驗器材帶來的污染和用來制備細胞的原始組織或器官的污染。支原體污染后，因為它們不會使細胞死亡可以與細胞長期共存，培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁，細胞無明顯變化，外觀上給人以正常感覺，實則細胞手到多方面潛在影響，如引起細胞變形，影響DNA合成，抑制細胞生長等。
細胞培養(yǎng)中，主要從以下幾個方面來預(yù)防支原體的污染：控制環(huán)境污染；嚴格實驗操作；細胞培養(yǎng)基和器材要保證無菌；在細胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素。
支原體污染細胞后，特別是重要的細胞株，有必要清除支原體，常用方法有抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補體聯(lián)合處理。支原體zui突出的結(jié)構(gòu)特征是沒有細胞壁，一般來講，對作用于細胞壁生物合成的抗生素，如 -內(nèi)酰胺類、萬古霉素等*不敏感；對多粘菌素（polymycin）、利福平、磺胺藥物普遍耐藥。對支原體zui有抑制活性及常用于支原體感染治療的抗生素是四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類及一些氟喹諾酮；其他類抗生素如氨基糖苷類、氯霉素對支原體有較小抑制作用，所以常不用來作為支原體感染的化學(xué)治療劑。
（四）細胞交叉污染對細胞的影響及污染物的檢測
細胞培養(yǎng)中，細胞間交叉污染并不罕見，多是由于在培養(yǎng)中操作時各種細胞同時進行，混雜使用器皿和液體所致，這種污染能使細胞的生長特性、形態(tài)特征等發(fā)生變化，有些變化較輕、不易察覺，有些可能由于污染的細胞具有生長優(yōu)勢zui終壓過原來細胞而導(dǎo)致細胞的生長抑制，zui終死亡。常用觀察細胞形態(tài)學(xué)、分析生長特性和核型、檢測細胞的標記物等方法檢測交叉污染的細胞。